尼康顯微鏡紫外激發(fā)塊組
尼康顯微鏡紫外激發(fā)塊組
包括在尼康顯微鏡紫外線激發(fā)熒光濾波器圖集四個(gè)包含任一的帶通或長(zhǎng)通發(fā)射（阻擋）能夠通過任一窄或?qū)挼乃{(lán)色，綠色和紅色的可見光波長(zhǎng)區(qū)域中，選擇性分離熒光發(fā)射濾光片小心平衡組合。這些過濾器的組合包括330和380納米的帶10的通帶寬度分布，40，和50毫微米之間的激發(fā)波長(zhǎng)范圍內(nèi)。三組合的采用相同的二色鏡，而第四組具有較低的波長(zhǎng)切于一個(gè)反射鏡，用它的較窄的激發(fā)帶重合。紫外線過濾套包含任長(zhǎng)通或帶通單發(fā)射濾光片。
紫外線過濾器集的性能可以通過從與每個(gè)個(gè)體濾光片組合的捕獲的同一視場(chǎng)的圖像進(jìn)行比較來判斷，如圖1所示的檢體是從小鼠腎臟獲得的并用薄的冷凍切片的組織切片（16微米）三種熒光團(tuán)的組合。腎小球的薄款元素和曲小管被標(biāo)記的Alexa Fluor488（綠色發(fā)光），麥胚凝集素。絲狀肌動(dòng)蛋白居住在腎小球和刷狀緣染色的Alexa Fluor568（紅色發(fā)射）鬼筆環(huán)肽，而在細(xì)胞核中的DNA counterstained用DAPI（藍(lán)色發(fā)光），從而完善了標(biāo)識(shí)制度。
在尼康紫外線激發(fā)一系列的孤帶通濾波器的發(fā)射，在UV-2E/ C，產(chǎn)生在漆黑的背景，深藍(lán)色的彩色圖像（圖1（a）），并非常適用于多色熒光成像使用與其他激發(fā)塊組合。在UV-2E/ C組合的帶通發(fā)射濾波器消除了熒光，從紅色和綠色的熒光團(tuán)在樣品標(biāo)記有多個(gè)探針。在UV-1A濾波器組合（圖1（b））中包含一個(gè)很窄的激發(fā)帶（10納米），其與由普通電弧放電燈所產(chǎn)生的汞i線（365納米）的波長(zhǎng)一致。該過濾器組合的目的是通過一個(gè)窄帶通激發(fā)區(qū)域盡量減少自體熒光，同時(shí)通過了所有的發(fā)射波長(zhǎng)*過420納米。在UV-1A濾波器組中的二色鏡具有*短的截止波長(zhǎng)（380納米）的紫外線系列。
通常被稱為標(biāo)準(zhǔn)的紫外組中，UV-2A組合配有50納米的帶通濾波器激勵(lì)覆蓋*長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外區(qū)域的。 耦合到一個(gè)400納米的截止二色鏡和一個(gè)長(zhǎng)通發(fā)射濾波器中，UV-2A產(chǎn)生的任何過濾器組合的*亮的圖象在Nikon紫外線集（圖1（c））。 在UV-2B是在配置文件中的UV-2A相似，但配備有一個(gè)較長(zhǎng)的切口上波長(zhǎng)（紅移由15納米）的屏障過濾器，以減少背景熒光。 時(shí)相比，UV-2A（圖1（c）和圖1（d）），在UV-2B產(chǎn)生暗得多的背景與**的整體圖像的對(duì)比度。 規(guī)格從各種尼康紫外濾光片組合的二色性反射鏡和過濾器都列在表1中。
尼康紫外線過濾組合規(guī)格
濾鏡套裝 描述 | 激發(fā)濾光片（nm） | 雙色鏡 (nm) | 屏障過濾 (nm) | 備注 |
UV-1A | 365/10 | 380 (LP) | 420 (LP) | Narrow Excitation Band |
UV-2A | 355/50 | 400 (LP) | 420 (LP) | Standard UV Cube |
UV-2B | 355/50 | 400 (LP) | 435 (LP) | Darker Background |
UV-2E/C | 360/40 | 400 (LP) | 460/50 | Medium Excitation Band |
表1
UV-2E/C - 在UV-2E/ C濾波器組合設(shè)計(jì)為紫外熒光銳截止濾波器模塊。過濾器是軟涂敷型旨在產(chǎn)生高信/噪比。在這種組合中使用的窄帶通阻擋濾波器被設(shè)計(jì)為顯著地減少或完全消除綠色和紅色可見光的波長(zhǎng)。
UV-1A - UV-1A組合被設(shè)計(jì)為紫外熒光具有窄的激發(fā)帶通（僅第 i -line汞光譜的利用）和窄的二色鏡的通帶，其*小化的自體熒光和光漂白濾波器塊。
UV-2A -在 UV-2A濾波器組合設(shè)計(jì)為紫外熒光標(biāo)準(zhǔn)的過濾塊，是*亮的紫外線過濾器尼康調(diào)色板設(shè)置。
UV-2B - UV-2B的組合被設(shè)計(jì)成用于紫外熒光，提供了一個(gè)更暗的背景和比UV-2A濾波器組合更好的對(duì)比度的通用濾波器塊。
熒光團(tuán)的寬陣列已經(jīng)開發(fā)出用激發(fā)波長(zhǎng)范圍從紫外區(qū)域的調(diào)查。 Catalogued表2是一些*流行的染料和熒光探針可以與尼康紫外線過濾器的組合來可視化的。 本地化的環(huán)境顯著影響熒光團(tuán)的吸收光譜和發(fā)射光譜的*大值（峰值）波長(zhǎng)的光，因此在表2中給出的值可能與實(shí)驗(yàn)條件而變化。 此列表僅旨在作為濾波器和熒光基團(tuán)的選擇的引導(dǎo)，而不應(yīng)被認(rèn)為是詳盡的或窮盡的匯編。 許多包含在表2中的熒光探針是專有的，已經(jīng)開發(fā)了以*小化，同時(shí)確保了熒光染料的吸收和發(fā)射光譜以及普通熒光濾光器的組合之間的*大程度的重疊光漂白。 注意，由于寬的吸收和發(fā)射帶，數(shù)在表2中列出的熒光探針也適合于與具有紫色和藍(lán)紫色激發(fā)帶通區(qū)域的過濾器組合使用。
熒光紫外激發(fā)光譜曲線
熒光染料 | 激發(fā)波長(zhǎng)（納米） | 發(fā)射波長(zhǎng) (納米) | 推薦的濾波器組合(s) |
Acridine Blue | 362 | 462 | UV-2A, UV-2B |
AFA (Acriflavin Feulgen SITSA) | 355-425 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 350 | 346 | 442 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 405 | 401 | 421 | UV-2A, UV-2B |
AMCA (Aminomethylcoumarin Acetic Acid) | 345 | 445 | UV-2A, UV-2B |
AMCA-X (AMCA Succinimidyl Ester) | 353 | 442 | All |
Aminoquinoline | 355 | 550 | UV-1A, UV-2A |
Aniline Blue | 370 | 509 | UV-1A, UV-2A |
ANS (Anilinonaphthalene Sulfonic Acid) | 372 | 455 | All |
Anthroyl Stearate | 371 | 446 | All |
BAO 9 (Bisaminophenyloxadiazole) | 365 | 395 | UV-1A, UV-2A |
BFP (Blue Fluorescent Protein) | 380 | 440 | All |
Bisbenzamide | 360 | 605 | UV-2A, UV-2B |
Blancophor SV | 370 | 435 | All |
Blue FluoSpheres | 350 | 440 | All |
Blue FluoSpheres (Short Wavelength) | 365 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Calcein Blue | 370-375 | 420-435 | All |
Calcofluor RW | 370 | 440 | All |
Calcofluor White (Standard Solution) | 365 | 435 | All |
Cascade Blue | 370 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Cascade Yellow | 402 | 545 | UV-1A, UV-2A |
CCF2 (GeneBLAzer) | 402 | 520 | UV-1A, UV-2A |
CellTracker Blue Dyes | 354-372 | 466-470 | All |
CPM Probes (Maleimide Coumarins) | 375-385 | 460-475 | All |
DANS (Dimethylaminonaphthalene) | 340 | 525 | UV-2A, UV-2B |
DANSA (Diamidinonaphthyl Sulfonic Acid) | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Dansyl Probes | 335-380 | 475-575 | All |
DAPI (Diamidinophenylindole) | 358 | 461 | All |
Dapoxyl Probes | 375-400 | 575-600 | UV-1A, UV-2A |
DIDS (Diisothiocyanatostilbene Disulfonic Acid) | 341 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Dimethylamino Sulfonic Acid | 340 | 520 | UV-2A, UV-2B |
DIPI (Bisimidazolinylphenylindole) | 364 | 455 | UV-2A, UV-2B |
Dopamine | 340 | 490-520 | UV-2A, UV-2B |
DPH (Diphenylhexatriene) | 350 | 452 | UV-2A, UV-2B |
ELF-97 Alcohol | 345 | 530 | UV-2A, UV-2B |
EBFP (Enhanced Blue FP) | 380 | 440 | All |
ERTracker Blue/White DPX | 374 | 575 | UV-2A, UV-2B |
Fast Blue | 360 | 410 | UV-1A, UV-2A |
Flazo Orange | 375-530 | 612 | UV-1A, UV-2A |
Fluorescamine | 390 | 460-475 | UV-2A, UV-2B |
FluoroGold (Hydroxystilbamidine) | 365 (High pH) | 565 (High pH) | All |
Fura-2 | 335 (High Ca) | 505 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
GFP (Blue Shifted, Y66H) | 382 | 448 | UV-2A, UV-2B |
GFP (Wild Type) | 395 | 508 | UV-1A, UV-2A |
Gloxalic Acid | 405 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Granular Blue | 355 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Hoechst 33258 | 346 | 460 | All |
Hoechst 33342 | 347 | 483 | All |
Hoechst 34580 | 392 | 440 | All |
HPTS (Hydroxypyrene Trisulfonic Acid) | 355 | 465 | All |
Hydroxymethylcoumarin | 360 | 455 | All |
HAT (Hydroxytryptamine) | 370-415 | 520-540 | All |
IAEDANS | 336 | 482 | UV-2A, UV-2B |
Indo-1 | 330 (High Ca) | 405 (High Ca) | All |
Intrawhite CF | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Laurdan | 364 | 497 | All |
Leucophors | 370-395 | 430-465 | All |
LysoSensor Blue | 373 | 425 | UV-1A, UV-2A |
LysoSensor Yellow/Blue | 329 (High pH) | 440 (High pH) | UV-1A, UV-2A |
LysoTracker Blue | 373 | 422 | UV-1A, UV-2A |
MAG Probes (Magnesium Indicators) | 330-350 | 420-505 | UV-2A, UV-2B |
Marina Blue | 365 | 460 | All |
Methoxycoumarins | 340-365 | 400-470 | All |
Monochlorobimane | 380 | 461 | UV-2A, UV-2B |
MPS (Methyl Green Pyronine Stilbene) | 364 | 395 | UV-1A, UV-2A |
Noradrenaline | 340 | 505 | UV-2A, UV-2B |
Nuclear Fast Red | 289-530 | 580 | UV-1A, UV-2A |
Nuclear Yellow | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
OPT (o-Phthalaldehyde) | 340 | 455 | UV-2A, UV-2B |
PBFI (Potassium Probe) | 334 (High K) | 525 (High K) | UV-2A, UV-2B |
Phorwites | 360-380 | 430 | All |
PMIA (Pyrenemethyl Iodoacetate) | 341 | 376 | UV-1A |
Prodan | 361 | 498 | All |
Pyrene | 345 | 378 | UV-1A |
Pyrozal Brilliant Flavin 7GF | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
QDots 525-655 | 350-450 | 525-655 | UV-2A, UV-2B |
Quin-2 (Calcium Probe) | 332 (High Ca) | 492 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
SBFI (Sodium Probe) | 334 (High Na) | 525 (High Na) | UV-2A, UV-2B |
Serotonin | 365 | 530 | UV-2A, UV-2B |
SITS (Stilbene Isothiosulphonic Acid) | 337 | 436 | UV-2A, UV-2B |
SPQ (Methoxysulfopropylquinolinium) | 344 | 443 | UV-2A, UV-2B |
Stilbene | 335 | 440 | UV-2A, UV-2B |
Tetracycline | 390 | 560 | UV-2A, UV-2B |
Thioflavin TCN | 350 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Thiolyte | 380 | 480 | All |
Tinopol CBS | 390 | 430 | UV-2A, UV-2B |
True Blue | 365 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Uvitex SFC | 365 | 435 | All |
表2
雖然如上所述充分的多數(shù)用紫外線波長(zhǎng)的調(diào)查服務(wù)的四個(gè)過濾器的組合，若干附加的特殊過濾器組可從廠家售后。 激發(fā)在250和300納米之間的波長(zhǎng)區(qū)域的熒光團(tuán)可使用過濾器的組合，包括集中在這個(gè)區(qū)域的帶通濾波器的激勵(lì)。 這些組合還需要二色鏡和屏障過濾器與切口對(duì)在紫外區(qū)域的波長(zhǎng)（以及檢測(cè)器對(duì)紫外線敏感）。 設(shè)計(jì)用于氙弧放電燈激勵(lì)濾波器組包含集中在300到400納米的區(qū)域?qū)挼膸ぐl(fā)濾光片（約100納米）。
其他專門的過濾器組包含發(fā)射濾波器具有兩個(gè)帶通區(qū)域?yàn)殡x子敏感的探針，如Indo-1, FluoroGold, Fura-2，和LysoSensor染料的比率的分析。其他套結(jié)合的窄水銀i線（365納米）的帶通濾波器的激發(fā)帶的帶通發(fā)射濾波器專門用于染料如DAPI, Hoechst 33258量身定做（通過合并的UV-2E/ C和UV-1A組合的元素。生產(chǎn)），和AMCA。此外，已經(jīng)開發(fā)了用于特定熒光團(tuán)的濾波器的組合。間設(shè)計(jì)的芘這些組合，ELF-97，核固紅，SPQ，瀑布藍(lán)和金探針。有長(zhǎng)通濾波器截止波長(zhǎng)上的黃色光譜區(qū)域過濾器集是用于檢查殘留的光致抗蝕劑在半導(dǎo)體晶片上是有用的。